Исследование
<<  Методы исследования нелинейных САУ Методы этносоциологических исследований  >>
Методы исследования макромолекул
Методы исследования макромолекул
Методы исследования макромолекул
Методы исследования макромолекул
Методы исследования макромолекул
Методы исследования макромолекул
Методы исследования макромолекул
Методы исследования макромолекул
Центрифугирование
Центрифугирование
Центрифугирование
Центрифугирование
2. Обработка объекта
2. Обработка объекта
2-3
2-3
Константы седиментации различных частиц
Константы седиментации различных частиц
3. Варианты центрифугирования (для молекул, которые незначительно
3. Варианты центрифугирования (для молекул, которые незначительно
Методы детекции нужных фракций
Методы детекции нужных фракций
Структура ПААГ
Структура ПААГ
Камера для ЭФ
Камера для ЭФ
ЭФ в ПААГ в присутствии ДСН
ЭФ в ПААГ в присутствии ДСН
Проведение ЭФ в ПААГ с ДСН
Проведение ЭФ в ПААГ с ДСН
Двумерный ЭФ
Двумерный ЭФ
ЭФ в ИЭТ
ЭФ в ИЭТ
Изоэлектрофокусирование
Изоэлектрофокусирование
Изоэлектрофокусирование
Изоэлектрофокусирование
Изотахофорез
Изотахофорез
Вестерн-блот
Вестерн-блот
Вестерн-блот
Вестерн-блот
© Karabelsky A.V. 19
© Karabelsky A.V. 19
© Karabelsky A.V. 19
© Karabelsky A.V. 19
Методы осаждения
Методы осаждения
Методы осаждения
Методы осаждения
© Karabelsky A.V. 19
© Karabelsky A.V. 19
Гель-фильтрация (гель-проникающая хроматография)
Гель-фильтрация (гель-проникающая хроматография)
Многообразие гелей для гель-фильтрации
Многообразие гелей для гель-фильтрации
Ионообменная хроматография
Ионообменная хроматография
Иллюстрация аффинной хроматографии
Иллюстрация аффинной хроматографии
Краситель на поверхности сорбента
Краситель на поверхности сорбента
Картинки из презентации «Методы исследования макромолекул» к уроку педагогики на тему «Исследование»

Автор: Shurilo. Чтобы познакомиться с картинкой полного размера, нажмите на её эскиз. Чтобы можно было использовать все картинки для урока педагогики, скачайте бесплатно презентацию «Методы исследования макромолекул.ppt» со всеми картинками в zip-архиве размером 3892 КБ.

Методы исследования макромолекул

содержание презентации «Методы исследования макромолекул.ppt»
Сл Текст Сл Текст
1Методы исследования макромолекул. © 33двигаются до тех пор, пока не станут
Karabelsky A.V. 19.02.2011. электронейтральными. Есть методы
21. 2. 3. 4. 6. 5. ОБЩАЯ биохимическая ПРЕПАРАТИВНОГО ИЭФ. © Karabelsky A.V.
стратегия исследования макромолекул. 19.02.2011.
Получение ОБЪЕКТА исследования (бактерии, 34Изотахофорез. В этом методе белки
дрожжи, клетки тканей). Э к с т р а к ц и разделяются в “Градиенте” напряжения.
я. Обработка объекта исследования (лизис, Каждая белковая зона будет обладать
разрушение, измельчение). Выделение нужной “собственной подвижностью” – в этой зоне
фракции или нужной макроструктуры будет свое значение напряжения. Граница
(мембраны, органеллы, ядро, рибосомы, между зонами четкая. Размер зоны зависит
микросомы, цитоплазмы и др.). Обработка от исходного количетва белка. © Karabelsky
препарата. Выделение фракции белков A.V. 19.02.2011.
(липидов, ДНК, РНК и т.д.). Детекция 35Диск-ЭФ. В одной системе используют
нужной молекулы. Выделение и очистка два геля разной пористости. Верхний гель
нужной молекулы. © Karabelsky A.V. служит для концентрирования белковой
19.02.2011. пробы. Нижний гель – для разделения белков
31. Получение объекта исследования. по размеру. © Karabelsky A.V. 19.02.2011.
Культивирование бактерий и дрожжей в 36Диск-ЭФ. Концентрирующий Гель (6%).
“необходимых” условиях. Сбор клеток Разделяющий гель 7.5-17% или др. ©
осуществляется центрифугированием или Karabelsky A.V. 19.02.2011.
фильтрацией. Получение ткани животного, 37Разберем последовательно процесс
человека (или использование культур проведения Диск-ЭФ. Приготовление пробы.
клеток). © Karabelsky A.V. 19.02.2011. Пробу белка после осаждения, выделения или
4Центрифугирование. Клетки хорошо очистки осаждают 10% ТХУ. Осадок белков
седиментируются при незначительных растворяют в буфере для проб, который
значениях g. В лабораторных условиях содержит буфер трис-HCl-ЭДТА, глицерин,
достаточно 5000 об/мин 10-15 минут – чтобы меркаптоэтанол, бромфеноловый синий и ДСН.
все клетки оказались на дне пробирки. © © Karabelsky A.V. 19.02.2011.
Karabelsky A.V. 19.02.2011. 38Приготовление геля. Сперва в камеру
52. Обработка объекта. © Karabelsky для геля заливают разделяющий гель
A.V. 19.02.2011. (например 12% ПААГ). Его готовят на буфере
6Основные типы обработкки. с щелочным значением рН (около 9). После
Гомогенизатор Поттера Ферментативный лизис застывания геля сверху наливают раствор
Механическое разрушение замороженных концентрирующего геля (обычно 6%), в
тканей (размолом или с помощью вращающихся буфере с рН 6.8. Делают лунки для проб. ©
ножей; под большим давлением; осмотическим Karabelsky A.V. 19.02.2011.
шоком; многократным чередованием 39Установка геля. Гель устанавливают в
замораживания и оттаивания ). © Karabelsky камеру и наливают сверху трис-глициновый
A.V. 19.02.2011. буфер. © Karabelsky A.V. 19.02.2011.
7Лизис клеток бактерий 40Нанесение пробы. Пробы перед нанесение
(распространенный способ). Добавляют к кипятят 5-10 минут и наносят в лунки геля.
клеткам лизоцим, ЭДТА в растворе сахарозы В соседние лунки помещают пробу с
? растворение наружных мембран. Мембраны маркерными белками с известной
превращаются в сферопласты (только подвижностью. © Karabelsky A.V.
внутренняя мембрана) Гомогенизация 19.02.2011.
сферопластов. Вместо гомогенизации можно 41Проведение ЭФ. Сперва ЭФ проходит при
добавить детергент (если не важна 50В (около 10мА). После того, как белки
нативность белков). Для выделения войдут в разделяющий гель – ЭФ проводят
плазмидной ДНК можно миновать стадию при 200-300 В. Белки мигрируют от – к + .
сферопластов и просто обработать клетки Скорость миграции контролируют по степени
щелочью в присутствии детергента. Крайний миграции красителя (он всегда идет
вариант – ультразвук. Но в этом случае первым). © Karabelsky A.V. 19.02.2011.
возможно дробление белка или ДНК(РНК). © 42Проявка геля. После ЭФ гель
Karabelsky A.V. 19.02.2011. вытаскивают. Обрабатывают ИПС для фиксации
8В основе методов экстрагирования лежит белков в порах геля и помещают в раствор с
размельчение материала в соответствующем красителем (обычно кумасси синий) на 1-2
буфере с последующим центрифугированием часа. После этого гель отмывают в уксусной
смеси. © Karabelsky A.V. 19.02.2011. кислоте. Белки на геле видны в виде полос
92-3. Обработка объекта и выделение синего цвета. © Karabelsky A.V.
нужной фракции. © Karabelsky A.V. 19.02.2011.
19.02.2011. Д и ф ф е р е н ц и а л ь н о 432. Метод блоттинга. Существует
е. несколько видов блоттинга. Все они
10Константы седиментации различных сводятся к тому, что иследуемый образец
частиц. © Karabelsky A.V. 19.02.2011. переносят на нитроцеллюлозный фильтр и
113. Варианты центрифугирования (для помещают этот фильтр в раствор, в котором
молекул, которые незначительно отличаются содержится вещество, способное
по размеру и величине S). © Karabelsky гибридизоваться с образцом. Места
A.V. 19.02.2011. гибридизации видны после специальных
12Методы детекции нужных фракций. © методов проявки. © Karabelsky A.V.
Karabelsky A.V. 19.02.2011. 19.02.2011.
133. Варианты экстракции (в зависимости 44Варианты блоттинга. Саузерн-блоттинг :
от целей). 1. Если есть опасность действия перенос ДНК на фильтр (в дальнейшем
протеаз – все процедуры проводят на холоду возможна гибридизация с меченой ДНК за
+ добавляют стабилизаторы (сахароза, счет комплементарности ? радиоавтография)
глицерин, ЭДТА) 2. Для выделения суммарной Нозерн-блоттинг: перенос РНК
фракции белков мембран можно обработать их Вестерн-блоттинг: перенос белков. Обычно
детергентами (SDS, тритон x-100). 3. Если проявку белков осуществляют за счет
цель-это очистка нуклеиновых кислот, то гибридизации белка с антителами. Поэтому
можно добавить к раствору протеазы. Таким этот вид блоттинга называют
образом, избавиться от белков. 4. Для иммуноблоттингом. © Karabelsky A.V.
отделения РНК от ДНК – можно добавить 19.02.2011.
фермент, расщепляющий ту или иную кислоту. 45Вестерн-блот. Перенос. © Karabelsky
© Karabelsky A.V. 19.02.2011. A.V. 19.02.2011.
144. Выделение суммарных фракций белков. 46Вестерн-блот. Проявка. © Karabelsky
Один из вариантов выделения суммарных A.V. 19.02.2011.
фракций белков – добавление к раствору 47© Karabelsky A.V. 19.02.2011.
сульфата аммония до 80% насыщения 48© Karabelsky A.V. 19.02.2011.
(высаливание). Возможно добавление 493. Определение концентрации белка в
детергентов или мочевины, если не важна растворе. Колориметрические методы
нативность белка. О процессе высаливания Биуретовый метод – образование в щелочной
см. дальше. © Karabelsky A.V. 19.02.2011. среде комплекса пептидных связей с ионами
154. Выделение суммарной фракции меди. 540нм Метод Лоури – Образование
нуклеиновых кислот. Основной способ – это комплекса ароматических АК с реактивом
обработка смесью фенол-хлороформ. Белки Фолина + биуретовая реакция. 750 нм Метод
разрушаются и легко отделяются Брэдфорд – основан на связывании с белками
центрифугированием. © Karabelsky A.V. красителя кумасси синего, спектр
19.02.2011. поглощения которого при этом меняется. 595
16Целью большинства биохимических нм. Спектрофотометрический метод. Основан
исследований является изучение свойств на способности ароматических АК поглощать
различных белков. Поэтому в дальнейшем УФ свет 280нм. Этот метод используется и
будут приведены описания основных методик для определения концентрации нуклеиновых
работы с белковыми препаратами. Будут кислот. © Karabelsky A.V. 19.02.2011.
описаны методы детекции белка в растворе и 50Методы выделения и очистки белков.
методы его выделения и очистки. © Фракционирование и концентрирование.
Karabelsky A.V. 19.02.2011. Осаждение Ультрафильтрация 2. Разделение и
175. Основные методы детекции белков. !! очистка гель-фильтрация Хроматография. ©
1.Электрофорез 2. Иммуноблоттинг 3. Karabelsky A.V. 19.02.2011.
Определение концентрации белка в растворе 51Фракционирование и концентрирование
(колориметрические и белков. Методы осаждения. Высаливание.
спектрофотометрические методы). © Добавление к раствору сульфата аммония до
Karabelsky A.V. 19.02.2011. определенной степени насыщения. Осаждение
18Электрофорез. В основе метода органическими растворителями (ацетоном)
электрофореза лежит миграция макромолекул Осаждение органическими полимерами (ПЭГ).
в электрическом поле. Движение белков © Karabelsky A.V. 19.02.2011.
обусловлено наличием на их поверхности 52Методы осаждения. Высаливание.
заряженных радикалов АК ДНК и РНК – Осаждение органическими растворителями или
заряжены отрицательно всегда. © Karabelsky ПЭГ. © Karabelsky A.V. 19.02.2011.
A.V. 19.02.2011. 53Ультрафильтрация. Препарат с белком
19Электрофорез молекул. Раствор с прогоняют через мембрану, которая имеет
препаратом помещают в гель (подобный поры определенного диаметра. Белки, размер
пищевому желе), причем этот гель подобен которых меньше диаметра пор, спокойно
сетке – со строго определенным размером через них проходят. Крупные белки при этом
пор. Гель находится в буфере, через концентрируются. © Karabelsky A.V.
который может проходить ток. При подаче 19.02.2011.
тока молекулы будут двигаться в 54© Karabelsky A.V. 19.02.2011.
определенном направлении (в зависимости от 55Гель-фильтрация (гель-проникающая
своего суммарного заряда) через поры этого хроматография). © Karabelsky A.V.
геля. Причем более крупные частицы будут 19.02.2011.
двигаться медленнее – так как постоянно 56Многообразие гелей для
будут натыкаться на сетку геля. Через гель-фильтрации. © Karabelsky A.V.
определенное время мы получим разделение 19.02.2011.
молекул по размеру и по заряду. © 57Метод ХРОМАТОГРАФИИ. -Ионообменная
Karabelsky A.V. 19.02.2011. -Аффинная -Иммунноафинная -На окрашенных
20Варианты гелей. Агарозный гель. В адсорбентах -Распределительная Все эти
основном используется для разделения методы чаще всего применяются на колонках
нуклеиновых кислот. Агароза – чистая – колоночная хроматография. © Karabelsky
фракция природного полисахарида агара. A.V. 19.02.2011.
Поставляется в порошках. Гелеобразование 58Ионообменная хроматография. ©
происходит после растворения агарозы в Karabelsky A.V. 19.02.2011.
буфере, нагревания до кипения и остывании. 59Сорбенты для ионообменников.
При остывании нити агарозы за счет Анионообменники - ионообменная группа DEAE
водородных связей образуют жгуты. Жгуты – диэтиламиноэтил. Катионообменники –
перекрещиваются и образуют пористую Карбоксиметильная группа. © Karabelsky
структуру. Размер пор зависит от исходной A.V. 19.02.2011.
концентрации агарозы. (0.8% гель для 60Ход ионообменной хроматографии.
ДНК-ЭФ). © Karabelsky A.V. 19.02.2011. Посадка белка на колонку (в буфере, рН
21Полиакриламидный гель (ПААГ, PAAG). которого отличается от изоточки белка на
Полиакриламид – продукт полимеризации 0.5-1 в ту или другую сторону) Промывка
акриламида. Полиакриламидные нити могут колонки исходным буфером (при этом
быть связаны между собой с помощью молекул несорбированные белки удаляются) Элюция
N,N’-метиленбисакриламида. После (десорбция) белка, за счет смены буфера.
совместной полимеризации получаем Новый буфер на 1-2 единицы рН отличается
структуры с порами. Размер пор зависит от от исходного (его рН находится по другую
исходных концентраций обоих компонентов. © сторону изоточки белка). Белок сходит с
Karabelsky A.V. 19.02.2011. колонки. Элюцию можно осуществлять и в
22Структура ПААГ. © Karabelsky A.V. градиенте концентрации соли. © Karabelsky
19.02.2011. A.V. 19.02.2011.
23Приготовление геля. Смешивают растворы 61Аффинная хроматография. Метод основан
АА и БисАА в нужном буфере. Добавляют на специфичном взаимодействии белка с
воду, инициатор полимеризации (персульфат некоторыми веществами (рецептор-лиганд,
аммония) и ускоритель полимеризации фермент-субстрат, белок-антитело и т.д.)
(ТEMED). © Karabelsky A.V. 19.02.2011. Лиганд изначально сорбирован на колонке.
24Разделение белков. М (кДа) %АА При нанесении пробы он связывается с
(процент ПААГ) 10-40 15-20 40-100 10-15 белком. Элюцию белка можно проводить
100-300 5-10 >300 5. © Karabelsky A.V. разными способами. Самый простой способ –
19.02.2011. резкое изменение рН или высокие
25Варианты электрофореза. Вертикальный концентрации соли. © Karabelsky A.V.
(в основном в ПААГ, для разделения белков) 19.02.2011.
Горизонтальный (агарозный гель, разделение 62Иллюстрация аффинной хроматографии. ©
нуклеиновых кислот). © Karabelsky A.V. Karabelsky A.V. 19.02.2011.
19.02.2011. 63Иммунноаффинная хроматографии. Этот
26Камера для ЭФ. © Karabelsky A.V. метод является вариантом обычной аффинной
19.02.2011. хроматографией. В качестве лиганда
27ЭФ в ПААГ в присутствии ДСН. ДСН используются специфические антитела. ©
(додецилсульфат натрия, SDS)– детергент. Karabelsky A.V. 19.02.2011.
Связывается с белками за счет гидрофобных 64Хроматография на окрашенных
взамодействий и растягивает их. адсорбентах. Хроматография на окрашенных
Сульфокислота ДСН делает все белки адсорбентах получила широкое
ОТРИЦАТЕЛЬНО заряженными. Таким образом распространение, что обусловлено
возможно разделение белков только по их относительной дешевизной и высокой
размеру. При этом скорость миграции белка емкостью сорбента. Специфичность
при определенной напряженности адсорбентов, связанных с красителем,
электрического поля - величина, зависящая такова, что их можно считать аффинными
только от размера белка. Ее называют адсорбентами, хотя используемый краситель
электрофоретической подвижностью. © имеет мало сходства и истинным лигандом.
Karabelsky A.V. 19.02.2011. Поэтому этот тип хроматографии часто
28Использование ЭФ-маркеров. В строгих называют псевдо-аффинной хроматографией.
условиях опыта величина Чаще всего окрашенные адсорбенты
электрофоретической подвижности - это используют для очистки
постоянная величина. Поэтому при нуклеотид-связывающих белков. При низкой
проведении ЭФ можно сравнить ее с ионной силе и относительно низких
подвижностью известных белков (маркёров) с значениях рН окрашенные адсорбенты
известной молекулярной массой. Таким являются эффективными катионообменниками,
образом можно определить размер так как благодаря наличию множества
исследуемого белка. © Karabelsky A.V. отрицательных зарядов они связывают
19.02.2011. основные белки. В некоторых случаях,
29Проведение ЭФ в ПААГ с ДСН. © адсорбент обладает высоким сродством к
Karabelsky A.V. 19.02.2011. белкам, которые не имеют
30Варианты белкового ЭФ. Нативный ЭФ нуклеотид-связывающих центров, например, к
(кислый или щелочной) Двумерный ЭФ альбумину и интерферону. © Karabelsky A.V.
Электрофорез в ИЭТ Изоэлектрофокусирование 19.02.2011.
Изотахофорез Диск-ЭФ. © Karabelsky A.V. 65Краситель на поверхности сорбента.
19.02.2011. F3GA. © Karabelsky A.V. 19.02.2011.
31Двумерный ЭФ. 1й этап – разделение по 66Распределительная хроматография. В
размеру в одних условиях. Поворот геля на основе этого метода лежит разделение
90 градусов и проведение ЭФ в других веществ по их растворимости в различных
условиях (например в градиенте рН или в растворителях. Часто этот метод называют
буфере с другим рН). © Karabelsky A.V. гидрофобной хроматографией.
19.02.2011. Распространенный вариант - модификация
32ЭФ в ИЭТ. рН буфера для ЭФ агарозы алифатическими углевородородами.
соответствует ИЭТ (изоэлектрическая точка) Они создают на поверхности сорбента
исследуемого белка. При подаче напряжения сильно-гидрофобную среду, за счет чего
белки с отличной ИЭТ мигрируют к разным белки могут залипать своими гидрофобными
полюсам. Нужный белок остается в лунке группами. Элюцию проводят либо просто
геля. © Karabelsky A.V. 19.02.2011. водой, либо снижением концентрации солей
33Изоэлектрофокусирование. В этом методе (например сульфата аммония). © Karabelsky
используется градиент рН в постоянной A.V. 19.02.2011.
электрическом поле. При этом белки
Методы исследования макромолекул.ppt
http://900igr.net/kartinka/pedagogika/metody-issledovanija-makromolekul-206230.html
cсылка на страницу

Методы исследования макромолекул

другие презентации на тему «Методы исследования макромолекул»

«Исследование в школе» - Организация проектно – исследовательской деятельности в школе ( из опыта работы). Волкова Т.С. Ступени исследовательской деятельности на уроке исследования. Нормативно-правовое обеспечение "Проектно - исследовательская работа в школе". Николаева Е.Л., Крестинина Клавдия. Методический день в школе.

«Онлайн исследования» - Конференция: онлайн маркетинговые исследования: инструменты и кейсы. Портал для рекрутинга панели. Сообщение: «МОЖНО ЛИ ДОВЕРЯТЬ ОНЛАЙН ИССЛЕДОВАНИЯМ? Как оценить качество панели? Мотивация и типология. Важные характеристики проекта. Количественные исследования в США: оффлайн VS онлайн*. Мотивация и качество.

«Исследование на уроках» - Выявите ключевые слова. Определите художественно-выразительные средства. Определите размер стиха, способ рифмовки. Петербург Петербург (город великолепный) (город страшный). Урок-исследование. Исследование художественного текста через призму рабочей версии. Столкновение с проблемой. Виды уроков-исследований.

«Маркетинговые исследования» - Экономе- трические модели. Как правило, профессионалы широкого профиля. Маркетинговые исследования. Осуществляют закупки не для потребления, а для последующей перепродажи. Изучение конкурентов и партнеров. Антимаркетинговые стереотипы. Деятельность по сегментированию рынка включает. Точность и стои-мость прогнозов.

«Исследование жизни» - Результаты. Показатель ЗОЖ: результаты. Цель исследования. Замечания. Определение ЗОЖ. Описание исследования. Отказаться от вредных привычек достаточно непросто в современном мире. Анкета. Резюме исследования. Спорт и прогулки. Еда. Группа исследователей. Исследование образа жизни слушателей Подготовительного отделения…

«Исследование Солнечной системы» - Когда наступает полдень (презентация). Изучение Солнечной системы. Темы исследований. Солнечная система (презентация). Далеко ли мы от Солнца (презентация). Воспитательные цели. Планеты Солнечной системы (презентация). Конкретные вопросы. О проекте. Способствовать развитию познавательного интереса Способствовать формированию информационной культуры.

Исследование

11 презентаций об исследовании
Урок

Педагогика

135 тем
Картинки
900igr.net > Презентации по педагогике > Исследование > Методы исследования макромолекул